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家庭组培操作方法

时间:2010-08-24  来源:互联网  编辑:  浏览:645次
如有霉菌长出,这说明灭菌时间不够,,需要适当增加灭菌时间…夏天温度过高时,有条件的可以摆放在空调室内,,没有空调室的,降温虽然困难些,但大多数试管苗是可以耐受的,不至于死去…接种时,揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,将接种用的材料送入接种箱内,开启紫外线灯,十五分钟后关闭紫外线灯,开启照明灯,即可开始工作…要特别注意准备好装污水污物的容器,尽可能地大些,因
家庭组培操作方法

制备
 

家庭组培因受到条件的限制,不可能配置大量的配养基,,一般每次配置1升为宜。煮制后用ph试纸测定后,分装成35-40瓶,塞好棉塞,包好包头纸。然后放入高压锅里高压灭菌,待高压锅喷嘴喷出蒸汽时,扣上压力阀,从压力阀喷气时起计时,连续维持15-20分钟后关火,压力消失后,打开锅盖,取出配养基,放入接种箱内待用。初次实验时,灭菌后的培养基应放置三五天后,观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出,这说明灭菌时间不够,,需要适当增加灭菌时间。
 

接种
 

将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内,因接种箱内的体积相对较小,所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上,不能随意摆放,箱内湿度较大,点酒精灯一定要是用打火机,不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器,尽可能地大一些,因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后,将一装有10-20ml福尔马林的磁杯放入箱内,倒入2-5g高锰酸钾,使其蒸气充满箱内,达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好,避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后,才能开始接种工作,这段时间大约需要5-10个小时。
 

接种时,揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,将接种用的材料送入接种箱内,开启紫外线灯,十五分钟后关闭紫外线灯,开启照明灯,即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念,要把一切物品都看成是带菌的,要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高,湿度较大,手容易出汗,所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作时要注意防火,由于空间较小,一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时,要将瓶口置于酒精灯上方,用右手的无名指和小指夹住棉塞尾,轻轻将棉塞拔出,棉塞不能置于箱内物品上,应用手指夹住,接种后,将瓶口在酒精灯上烧灼一下,棉塞也烧灼一下,,然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好,扎好包头纸,用铅笔标明品种、接种日期、编号等,然后重复下一瓶。
其实,用接种箱接种与超净工作台相比较,工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的,操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
 

培养
 

在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控,所以要充分的利用自然条件,接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方,如靠窗的书柜、写字台上,但要避免日光直射,一般室温在22-28摄氏度时都能正常生长,不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低,可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱,里面装一两个15-25瓦的白织灯,既可以補助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时,有条件的可以摆放在空调室内,,没有空调室的,降温虽然困难一些,但大多数试管苗是可以耐受的,不至于死去。小苗长出后,摆放在书柜或工作台上,感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵,无疑是一种享受。

栽培
当小苗长到一定的时候,就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根,待长出一定根系时,就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面,一是要适当降低温度;二是要增大湿度;三是要严格控制杂菌危害;四是要保证种植介质的疏松透气;五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质,把小苗种植后用百菌清喷雾浇根,盖上塑料薄膜,少量的小苗干脆用玻璃杯盖住,大约15天后就能揭去覆盖物,便可进行正常管理了。
 

家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情,只要多开动脑筋,多想一些办法,做起来也是很容易地。万事开头难,办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长,原来条件不允许,科研经费很紧张,刚开始的时候,一年的科研经费只有3000元,那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草种子的无菌培养、体细胞融合,都获得了很好的成绩,我们就是用这种方法做的,当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊,他们认为很珍贵的组培小苗,被我们丢得到处都是,觉的不可思议,他们做不出来的,竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功,而是告诉想从事这个行业的朋友,不要自己把自己的能量看得太低,也不要迷信权威、只要自己有信心,严格地按照科学的规律去做,没有什么做不了的,没有什么办不到的。
 

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