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抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究一

时间:2009-03-26  来源:易生实验室  编辑:朱腾飞  浏览:512次
抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究材料与方法.供试材料..供试药剂%多菌灵可湿性粉剂%代森猛锌可湿性粉剂yl.%冠菌清干粒剂%扑海因悬浮剂%百菌清可湿性粉剂...供试菌种微球菌micrococcus葡萄球菌staphylococcus棕曲霉黑曲霉黑青霉杜氏青霉都是从被污染的培养植物上分离纯化获得...培养基
抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究一

1材料与方法1.1供试材料

   1.1.1供试药剂50%多菌灵可湿性粉剂、70%代森猛锌可湿性粉剂、yl一1、57.6%冠菌清干粒剂、50%扑海因悬浮剂、75%百菌清可湿性粉剂.

   1.1.2供试菌种微球菌(micrococcus)、葡萄球菌(staphylococcus)、棕曲霉、黑曲霉、黑青霉、杜氏青霉都是从被污染的培养植物上分离纯化获得.

   1.1.3培养基yeb培养基;pda培养基.

   1.2试验方法

   1.2.1污染细菌鉴定革兰氏染色法初步鉴定细菌.

   1.2.2抑菌强度测定无菌水稀释药剂成1000mg/l.细菌取0.2ml对数期菌悬液(真菌取0.2ml孢子菌悬液(106个/ml))与20mlyeb(真菌pda)培养基混匀倒平板.凝固后每一平板置2个牛津杯(直径8mm),一杯加o.2ml药剂,另一杯以无菌水作对照,置于28℃温箱培养,葡萄球菌培养24h、微球菌和真菌培养48h后,取出测抑菌圈直径.

   1.2.3细菌最低抑菌浓度测定用无菌水稀释药剂成2000mg/l原液,然后按1:2,1:4,l:8.二稀释至15.625mg/l,余下均同1.2.2.

   1.2.4菌丝生长抑制实验用无菌水配制成106个/ml孢子悬浮液,分别取0.2ml孢子悬浮液与20mlpda培养基混匀倒平板,28℃温箱遮光培养48h后备用.用无菌水稀释药剂成2000mg/l原液,然后配制成1000,500,250……0.9765625mg/l的含药培养基,对照为不加药的培养基.用打孔器(直径7mm)从备用平板中打取菌饼,菌丝面朝下接种于含药培养基中央,每平板加一个菌饼,3次重复,28℃温箱遮光培养,每2d取出测量菌落直径.

   生长抑制率(%)={(对照菌落直径一菌饼直径)一(处理菌落直径一菌饼直径)/(对照菌落直径一菌饼直径)}*100%

   1.2.5袍子萌发抑制试验将孢子接种于液体pda中,于28℃、130rad/min摇床上培养24h,双层纱布过滤后用无菌水调制成104个/ml备用.用无菌水稀释药剂成2000mg/l的原液,然后配制成1000、250、62.5……0.9765625mg/l的含药培养基.分别取2ml孢子悬浮液与不同浓度的含药培养基混匀,3次重复,28℃培养,72h后镜检计算孢子萌发抑制率.

   孢子萌发抑制率(%)={(对照萌发率一处理萌发率)/对照萌发率}x100%

   1.2.6对植物生长抑制试验与开放组培初探用无菌水配制药剂成2000mg/l原液,4000rad/min离心10min,上清液用孔径20nm的滤膜过滤备用.将滤好的原液与培养基混合配制成1000、250、62.5mg/l的含药培养基.取健壮的马铃薯试管苗剪成小段,接种于上述含药培养基,对照为不加药的培养基,每梯度6瓶,每瓶10株,其中3瓶正常放置,3od后观察马铃薯生长情况,另外3瓶开口放置,20d后观察马铃薯的污染情况.

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