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野菊嫩茎的组织培养二

时间:2009-03-25  来源:未知  编辑:朱腾飞  浏览:736次
放在脸盆中用流水冲洗约min,再用稀释的洗洁精漂洗约min,最后用流水洗净,放人灭过菌的角瓶中以待灭菌…结果与分析.野菊嫩茎侧芽的诱导及生长状况接种后第天,野菊嫩茎外观呈嫩绿色,水渍状,与灭菌前无异….培养基的选择由于野菊花同观赏菊花同科同属,据资料介绍,用于菊花培养的培养基有mswhitenb等,般采用ms为基本培养基,添加各种激素进行培养图…
野菊嫩茎的组织培养二

试验方法

   2.1野菊嫩茎的选择

   试验材料在2007年10月29日上午10:00采取。选生长健壮无病虫害的野菊植株,从新分生的枝条上剪取幼嫩带尖茎部15cm左右,作为外植体使用。

   2.2野菊嫩茎的处理

   将剪取的嫩茎带回实验室,将茎上的叶片连带叶柄一同剪掉,但叶柄基部留下5mm以保护侧芽,避免侧芽在灭菌过程中受损。将去掉叶柄的嫩茎剪成长约2cm左右的小段。放在脸盆中用流水冲洗约5min,再用稀释的洗洁精漂洗约10min,最后用流水洗净,放人灭过菌的三角瓶中以待灭菌。灭菌时,将75%的酒精倒人盛有嫩茎小段的三角瓶,接着倒出进行表面灭菌,而后用0.1%的升汞溶液灭菌3min,最后用无菌水冲洗3一4次,在超净工作台上将其接种于培养基上。

   2.3培养基的选择

   由于野菊花同观赏菊花同科同属,据资料介绍,用于菊花培养的培养基有:ms、white、n6、b5等,一般采用ms为基本培养基,添加各种激素进行培养图。诱导培养基为:ms十ba1mg/l+naa0.lmg/l,ph为5.8左右,培养的温度范围是24一26℃,光照强度是1500一300olx,每天照光约12h。继代培养基为ms或ms+ba0.2mg/l十naa0.5mg/l的培养基上。生根培养基为1/2ms十naa0.1mg/l。另外,各培养基中均加琼脂粉5.5g/l,蔗糖30g/l.

   2.4组培苗练苗

   将瓶苗移出培养室,放在准备室内,打开瓶口封口,将瓶苗室温放置2一3d后,进行移栽。将实验田翻耕,使耕作层土层疏松,整理出畦。在土壤上面铺一层约5cm的蛙石,浇透水。将小拱棚支架搭好备用。将双斜面小棚打成屋脊状或三角形,拱棚南北走向,中间设一条拉杆,可起到坚固抗风的作用阁。一般棚内相对湿度可达70%~100%,白天通风时,棚内相对湿度可保持在40%一60%;夜间密闭时可达到90%以上。棚内地温比露地高5一6℃,有利于再生苗的生长和提高再生苗成活率。当瓶苗根长至2cm左右时,用镊子轻轻取出,用流水将瓶苗根部的培养基冲洗干净,然后栽在准备好的蛙石中,随后用喷壶浇一遍透水,将棚膜罩上,以水压边。白天气温过30℃时用遮阳网遮荫。驯化过程中通过通风、遮荫、洒水使棚内温度白天保持在25℃左右。待白天气温稳定在28℃以上,生了新根约3cm时,可去膜移栽。3结果与分析

   3.1野菊嫩茎侧芽的诱导及生长状况

   接种后第2天,野菊嫩茎外观呈嫩绿色,水渍状,与灭菌前无异。未发现染菌。第3天野菊嫩茎体表有针尖般小黑点,极少部分腋芽已开始萌动,部分叶柄有于枯现象,未发现染菌。第4天大部分野菊嫩茎体表水渍状消失,留有顶芽和侧芽的饱满嫩茎上的芽开始生长。部分叶柄短的嫩茎上部有褐色水渍状现象,这部分芽未萌发。第5天野菊嫩茎体表水渍状消失,叶柄大部分干枯,侧芽萌发在90%以上,大小如小米粒的一半,茎尖幼叶有展开迹象。第6天野菊嫩茎茎尖幼叶已展开,侧芽大部分萌发。第8天后多数芽已展开,茎段上黑点明显。第9天幼芽生长良好,但展开的叶片边缘有焦枯现象。第10天后部分茎尖呈水渍状,生长好的,叶片已完全展开,翠绿,叶面干燥。大部分芽生长良好,部分抽出了嫩枝(注:黑点为灭菌过程中升汞对其体表的损害;继代转接一次,培养基为ms+ba0.2mg/l+naa0.5mg/l)。

   3.2野菊嫩茎的继代增殖培养

   当茎尖及腋芽萌发生长,长到距离瓶口约1cm,即高约6~7cm时可进行增殖培养。嫩茎生长一段时间后,下部可分化出大如黄豆的棕褐色组织,但芽少有分化。将嫩茎上诱导萌发的腋芽切成数段,每段带1芽1叶,进行短枝接种增殖培养。将其基部插人ms或ms+ba0.2mg/l十naa0.5mg/l的培养基上,约4周后腋芽长成小植株。3.3瓶苗的诱导生根

   野菊继代长成的小植株部分被转人生根培养基1/2ms+naa0.lmg/l,部分继续增殖培养ms十ba0.2mg/l+naa0.5mg/l。5d后,有少部分瓶苗其根长至2mm,部分还处于根原基状态,只有小突起,大部分还是未萌动的。株高有所增加但不太明显。叶色黄绿,有些小叶已经干枯,但整体长势较好;8d后,绝大部分已生根约2mm,其叶色开始转绿,整体长势较好;9d后,有少部分瓶苗根的长度已长至lcm,大部分在0.5~0.7cm左右,株高无大的变化,但其粗度明显增加,叶色由黄绿转为绿色,长势较好。

   3.4组培苗练苗

   练苗的野菊再生苗长势很好,仅在1周左右即长出新根。2周后其叶色浓绿,茎秆呈紫褐色或嫩绿色,粗壮。这时可进行移栽。

   4结语

   该研究发现以野菊的嫩茎作为外植体进行组织培养,培养基要求不苛刻,诱导、继代培养及生根培养均可成功操作。并且瓶苗的练苗也非常成功,说明野菊再生根的能力很好。通过试验了解到,野菊的嫩茎可进行组织培养,而且见效快,为野菊的快速繁殖开辟了广阔的前景。

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