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切花菊种苗脱毒及病毒检测技术研究

时间:2016-05-03  来源:  编辑:  浏览:116次
因此,如何采用有效办法,脱除病毒,防止退化,对进步切花菊产品德量,意义重大…实验资料与研讨方式.实验资料选择当前切花生产中利用较广欣赏价值较高的如下个切花菊品种作为研讨对象即日本黄寒山阳黄秀芳粉秀芳皇后金星….研讨方式..脱毒程序确立田间标定发病植株取材消毒茎尖剥离与接种继代增殖及生根造就原原种苗生产原种苗生产防止病毒次侵染—

  切花菊(chrysanthemum.spp.)(cut-flower breeds)是世界五大鲜切花之一,在国际切花市场上占领主要位置,我国的种植面积正在不断扩展。但目前切花产品的质量往往较低,很难到达出口尺度。造成这种现象的原因是多方面的,但是由于病毒侵染而导致品种退化是其中最主要的原因之一。病毒沾染之后,植株生长势显明削弱,花朵变小,抗性下降,质量降落。因此,如何采用有效办法,脱除病毒,防止退化,对进步切花菊产品德量,意义重大。

1 实验资料与研讨方式

  1.1 实验资料

  选择当前切花生产中利用较广、欣赏价值较高的如下6个切花菊品种作为研讨对象:即日本黄、寒山阳、黄秀芳、粉秀芳、皇后、金星。

  1.2 研讨方式

  1.2.1 脱毒程序确立

  田间标定发病植株——取材——消毒——茎尖剥离与接种——继代增殖及生根造就——原原种苗生产——原种苗生产——防止病毒二次侵染——病毒检测。

  1.2.2 脱毒技巧研讨

  目前,植物脱毒技巧的方式虽然很多,但后果差异很大。本项研讨所采取的是植物脱毒后果较好的茎尖造就脱毒技巧。研讨中分辨考核了不同的茎尖大小、不同的取材部位、不同的取材时光等因素对脱毒后果的影响。

  1.2.3 脱毒后果检测

  本实验采取抗血清鉴定法中的间接酶联免疫吸附法。对番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,tav)、菊花b病毒(chrysanthemum virus b,chbv)及菊花叶病毒(chrysanthemum mosaic virus,chmv)进行检测。

  实验设计如(表1)所示。a、b、c、d四行动被检测组培切花菊大苗,e、f、g、h四行动被检测组培瓶苗样品。用酶联仪测定波长490nm处的光接收值p(od值),阴性对比od值为n,盘算p/n值,若p/n≥2则为阳性,即样品中含有病毒。

  





  1.2.4 大田栽培验证

  应用获得的脱毒种苗,在大棚中生产栽培,与未经脱毒的种苗进行对比,分辨考核花枝粗度、高度、产花量、产花及格率等指标的变更情形。

2 研讨成果与剖析讨论

  2.1 脱毒技巧

  2.1.1 不同茎尖大小对脱毒后果的影响

  由(图1)可见,茎尖造就的成活率与接种茎尖的大小成正比,而脱毒率与接种茎尖大小成反比。成果显示,接种茎尖越小,则脱毒后果越好,在茎尖为0.1~0.2mm时,脱毒率达100%;但茎尖越小,其成活率越低。尽管0.2mm的茎尖成活率到达45%,但其生长很弱。因此,要获得较高的成活率,剥离的茎尖体积要大。依据实验成果,当茎尖为0.3~0.5mm时,脱毒率也可达78.5%~88.5%,因此,切花菊的茎尖脱毒造就可以应用0.3~0.5mm大小的茎尖,能够在基础获得无毒苗的前提下,进步成活率。

  



  图1 茎尖大小与成活率和脱毒率的关系

  2.1.2 不同取材部位对脱毒后果的影响

  在生长季节,标定发病植株,分辨取带侧芽、顶芽的茎段和叶片,按惯例消毒后,取主茎茎尖、侧芽茎尖,大小为0.3~0.5mm,以及0.2×0.2cm大小叶片,接种到ms+ba2.0mg/l+naa0.05mg/l造就基中,30天后检查发育情形,并取幼苗进行病毒检测。

  由(图2)可见,主茎茎尖和侧芽茎尖作为外殖体资料进行脱毒造就,均能获得很好的脱毒后果,脱毒率接近80%或到达80%以上,而且植株再生引诱频率也较高。叶片作为外殖体资料,尽管其分化率也较高,但不能获得脱毒苗,因此不适合作为脱毒资料。一般以为:病毒在植物体内的散布是不均匀的,生长点0.1~1mm区域很少含有病毒或没有病毒。重要是因为病毒的滋生运转速度与分生区细胞的生长速度不同,病毒向上运转速度慢,而分生组织细胞增殖快,成果使茎尖分生区细胞不含病毒。因此,剥离茎尖进行组织造就可以获得无病毒植株。

  2.1.3 不同取材时光对脱毒后果的影响

  在5月(春季)、8月(夏季)、10月(秋季)3个季节,取田间带病毒资料,进行茎尖造就,30天后获得幼苗,取幼苗进行病毒检测(图3)。

  



  图2 取材部位对脱毒后果的影响

  



  图3 取材时光与脱毒率的关系

  由(图3)成果可见,在不同时光取材进行茎尖造就并检测幼苗病毒,脱毒率有必定差别,夏季8月份取材时脱毒率较高,而春季5月和秋季10月取材造就后,脱毒后果稍差,原因重要是夏季高温对于植株体内病毒具有必定的克制造用,使其不易增殖,因此茎尖中病毒数量更少,从而夏季高温期取材,脱毒后果较好。

  2.2 脱毒后果检测

  2.2.1 番茄不孕病毒(tav)检测成果

  由(表2)盘算的p/n值成果可见,送检6个品种的切花菊大苗及组培苗已经脱除伤害切花菊的番茄不孕病毒(tav)。

  





  2.2.2 菊花b病毒(chbv)

  菊花b病毒(chbv)检测成果见(表3)。由表3盘算的p/n值成果可见,6个品种的切花菊大苗和组培苗已经脱除伤害切花菊的菊花b病毒(cvb)。

  





  2.2.3 菊花花叶病毒(chmv)

  检测成果见(表4)。由(表4)盘算的p/n值成果可见,6个品种的切花菊大苗和组培苗已经脱除伤害切花菊的菊花花叶病毒(chmv)。

  





  2.3 大田栽培验证

  应用经过脱毒的切花菊种苗在大棚中实际生产栽培,并与普通苗对照。在开花时每个处置随机抽取25支进行实际测量花枝高度、粗度,反复1次;另随机抽取2个样方,各1m2,盘算其产花量;抽取2个大棚,盘算其切花及格率。调查成果及方差剖析成果见(表5~9)。

  





  





  





  





  





  从成果可以看出,脱毒苗经过实际生产栽培以后,在株高、产花量上差别不显明,但在花枝粗度、切花及格率两个指标上差别非常明显,与普通苗相比,脱毒苗使切花菊的花枝粗度增添0.10cm(16.7%),切花及格率进步12.0%,大大进步了切花的质量。

  经过对花枝高度、花枝粗度两个指标进行方差剖析后可知,与普通苗相比,切花菊脱毒苗在花枝粗度上达差别极明显程度,而切花菊的花枝高度差别不明显。因为花枝高度重要取决于密度,密度大则高,密度小则矮,而花枝密度是依附修剪而人为控制的。

3 结论

  (1)研讨成果表明,当前切花菊种苗病毒侵染较为严重,而通过茎尖造就可以有效去除病毒。茎尖造就时,取材大小对造就成活率及脱毒率的影响极为明显,体积越小,则成活率越低,但脱毒率越高。当茎尖大小为0.1~0.2mm时,脱毒率可达100%,但成活率只有10%~45%,且幼苗较弱;当茎尖大小为0.3~0.5mm时,脱毒率为88.5%~78.5%,成活率则进步到85%~95%,而且幼苗较壮。从生产实际动身,取材时茎尖大小以0.3~0.5mm较为适合,可以同时到达较高的脱毒率和成活率。

  (2)从不同的植株部位取材,对脱毒后果具有必定影响,顶芽茎尖及侧芽茎尖均可获得幻想脱毒后果,而且二者之间差异不大,但叶片造就,不能到达脱毒目标,进一步验证了病毒在植物茎尖中的侵染特色。

  (3)在春、夏、秋三季分辨取材,进行脱毒造就,均可获得幻想的后果,但从实验成果中发明,夏季取材脱毒后果更好些。

  (4)应用获得的脱毒种苗进行实际栽培,显明地进步了切花质量,与普通苗比拟,脱毒苗可以使花枝粗度进步19.6%,切花及格率进步12.0%。

  (5)抗血清鉴定法中的间接酶联免疫吸附法用于切花菊脱毒种苗中的脱毒后果检测,敏锐度高,操作较为简便,可以进行推广利用。

  

参考文献:

  [1] 胡琳.植物脱毒技巧[m].北京

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